Разработка mini-Mu системы для эффективной интеграции и амплификации генетического материала в хромосому бактерии E. coli в отсутствие селективного маркера.

НазваниеРазработка mini-Mu системы для эффективной интеграции и амплификации генетического материала в хромосому бактерии E. coli в отсутствие селективного маркера.
страница1/4
Дата конвертации23.03.2013
Размер0.49 Mb.
ТипАвтореферат
  1   2   3   4


На правах рукописи


Саврасова Екатерина Алексеевна


Разработка mini-Mu системы для эффективной интеграции и амплификации генетического материала в хромосому бактерии

E. coli в отсутствие селективного маркера.

03.00.03 - Молекулярная биология

АВТОРЕФЕРАТ



диссертации на соискание ученой степени

кандидата биологических наук


- Москва 2007 -

Работа выполнена в лаборатории №3 Закрытого Акционерного общества «Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика» (ЗАО «АГРИ»).

Научный руководитель:

доктор биологических наук В.З. Ахвердян
Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Р.С. Шакулов

ФГУП ГосНИИгенетика

кандидат биологических наук, Г.И. Каратаев

старший научный сотрудник

НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи РАМН

Ведущая организация: Институт общей генетики РАН


Защита диссертации состоится «___» ________ 2007 года в 1400 на заседании Диссертационного совета Д 217.013.01 при ФГУП «Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов» по адресу: 117545, г. Москва, 1-й Дорожный проезд, д. 1.


С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУП «ГосНИИгенетика»

Автореферат разослан «___» ________ 2007 г.

Ученый секретарь

Диссертационного совета,

кандидат биологических наук Г.Г. Заиграева


Общая характеристика работы


Актуальность проблемы. При конструировании штаммов-продуцентов различных биологически активных веществ, в частности аминокислот, широко используется амплификация целевых генов в составе плазмид. Данный подход имеет ряд недостатков, связанных с последующим использованием плазмидных штаммов в производстве: законодательные ограничения; потенциальная нестабильность плазмидных штаммов при росте в неселективных условиях; сложность создания больших групп независимо экспрессирующихся генов в составе одного вектора.

В настоящее время предпочтительным является использование бесплазмидных штаммов-продуцентов. При конструировании таких штаммов на первоначальном этапе осуществляется создание в составе плазмид интегративных кассет, содержащих целевые гены или опероны биосинтеза с оптимизированным уровнем экспрессии, затем проводится интеграция данных кассет в бактериальную хромосому с использованием различных механизмов рекомбинации. Интеграция генетического материала возможна по механизму общей рекомбинации бактериальной клетки, при условии наличия достаточно протяженной области фланговой гомологии, а также по механизму сайт-специфической рекомбинации, например, бактериофага (Datsenko K.A. et al., 2000). Другим подходом является использование свойств транспозирующихся элементов.

Транспозоны являются превосходными и широко используемыми генетическими инструментариями. К настоящему времени разработано много различных типов специализированных производных транспозонов. Наиболее широко используемыми являются конструкции, полученные на основе элементов Tn5, Tn10 и бактериофага Mu, также используются конструкции, основанные на элементах Tn3 и . Транспозоны разнообразны по своей природе и свойствам, среди них наиболее хорошо изученным является фаг-транспозон Mu. На основе данного элемента были разработаны системы для получения транскрипционных и трансляционных фьюзов, клонирования in vivo, картирования хромосомы (Groisman E.A. et al., 1984; Casadaban M. J. et al., 1986; Lawes M. et al., 1995).

Разработка нового генетического инструментария, использующего транспозиционные свойтва фага-транспозона Mu, позволяющего эффективно интегрировать генетический материал в хромосому E. coli в отсутствие антибиотических маркеров в составе mini-Mu векторов, является актуальной и практически значимой для биотехнологии, поскольку в настоящее время предъявляются повышенные требования к промышленным штаммам-продуцентам, одним из которых является отсутствие каких-либо антибиотических маркеров в хромосоме штаммов.
Цели и задачи работы. Диссертационная работа посвящена разработке эффективной генетической системы на основе фага-транспозона Mu и ее применению для конструирования штаммов-продуцентов различных аминокислот.

В ходе работы решались следующие задачи:

- Сравнительная оценка эффективности транспозиции транспозонов: Tn5, mini-Tn10, MD4041 и MD4041-thrA*BC.

- Оценка возможности использования выбранного транспозона для прикладных задач. Конструирование модельного штамма-продуцента треонина с использованием транспозонов MD4041-thrA*BC. Проверка характеристик полученных штаммов: стабильность продукции и число копий mini-Mu кассет.

- Конструирование на основе элемента mini-Mu MD4041 векторов, содержащих антибиотический маркер, обеспечивающих как эффективную интеграцию и амплификацию генов, так и стабильность полученных штаммов.

- Создание на основе mini-Mu MD4041 новой линии интегративных векторов (малокопийных, безмаркерных), необходимых для решения ряда задач при конструировании штаммов-продуцентов, соответствующих повышенным требованиям.

- Оценка эффективности использования элементов генетической системы в неселективных условиях.

- Применение данной системы при конструировании бесплазмидного безмаркерного штамма-продуцента валина.

  1   2   3   4

Похожие:

Разработка mini-Mu системы для эффективной интеграции и амплификации генетического материала в хромосому бактерии E. coli в отсутствие селективного маркера. icon«Развитие методов конструирования бесплазмидных рекомбинантных штаммов Escherichia coli : от Mu-зависимой “случайной” интеграции до сайт-специфических перестроек хромосомы»
От Mu-зависимой “случайной” интеграции до сайт-специфических перестроек хромосомы
Разработка mini-Mu системы для эффективной интеграции и амплификации генетического материала в хромосому бактерии E. coli в отсутствие селективного маркера. iconРукоятка
Тело маркера включает в себя две взаимосвязанные системы, Болт и спусковой механизм
Разработка mini-Mu системы для эффективной интеграции и амплификации генетического материала в хромосому бактерии E. coli в отсутствие селективного маркера. iconКонспект урока по биологии в 7 классе по теме «Бактерии. Грибы. Лишайники»
Цель урока: определить уровень усвоения материала по темам «Бактерии», «Грибы», «Лишайники» и уровень сформированности общеучебных...
Разработка mini-Mu системы для эффективной интеграции и амплификации генетического материала в хромосому бактерии E. coli в отсутствие селективного маркера. iconГазогенератор фосфина инициатор проекта
Отсутствие на отечественном рынке эффективной и безопасной обработки деловой древесины и зерна для их продажи заказчику в соответствии...
Разработка mini-Mu системы для эффективной интеграции и амплификации генетического материала в хромосому бактерии E. coli в отсутствие селективного маркера. iconУрок-игра
Ученический коллектив формируется из состава спецконтингента. Такой коллектив и коллективом то не назовешь: разновозрастные (от 18...
Разработка mini-Mu системы для эффективной интеграции и амплификации генетического материала в хромосому бактерии E. coli в отсутствие селективного маркера. iconОписание белка bccp ecoli из организма Escherichia coli
КоАкарбоксилазе синтезируется в организме кишечной палочки – Escherichia coli, виде из порядка энтеробактерий, класса гамма-протеобактерий,...
Разработка mini-Mu системы для эффективной интеграции и амплификации генетического материала в хромосому бактерии E. coli в отсутствие селективного маркера. iconТихонов Николай Александрович
Разработка эффективной методики по поиску и привлечению новых перспективных клиентов. В результате объем заключенных договоров увеличился...
Разработка mini-Mu системы для эффективной интеграции и амплификации генетического материала в хромосому бактерии E. coli в отсутствие селективного маркера. iconСтруктура трнк к аспарагиновой кислоте из Escherichia Coli
Аннотация: Анализ вторичной и третичной структур трнк к аспарагиновой кислоте из Escherichia Coli средствами биоинформатики
Разработка mini-Mu системы для эффективной интеграции и амплификации генетического материала в хромосому бактерии E. coli в отсутствие селективного маркера. iconРазработка эффективной технологии комплексной переработки нефелинов с добавками бокситов
Работа выполнена на кафедре металлургии цветных металлов Санкт-Петербургского государственного горного института имени Г. В. Плеханова...
Разработка mini-Mu системы для эффективной интеграции и амплификации генетического материала в хромосому бактерии E. coli в отсутствие селективного маркера. iconПрограмма вступительного экзамена в магистратуру по направлению Экологическая генетика
Принципы генетического анализа. Основы гибридологического метода и роль Г. Менделя в его разработке. Разрешающая способность рекомбинационного...